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大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

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大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

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產品描述
本品為大腸桿菌HMS174 (DE3)(基因型:K-12,F-,λDE3[lacI,lacUV5-T7gene1,ind1,sam7,nin5],recA1,hsdR19,IN(rrnD-rrnE)1,rph-1,rpoB331(rifR))制作的高效感受態,該菌株源于大腸桿菌K12菌株,含有RecA突變。對于能夠導致DE3噬菌體損失的特定基因,該菌株能夠穩定表達這種基因。DE3是溶源性的λDE3,帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝,可在IPTG誘導下表達T7 RNA聚合酶。HMS174 (DE3)具有完整的乳糖代謝途徑,故在誘導蛋白表達時,可以用乳糖同時作為唯yi碳源和誘導劑,因此不需要IPTG作為誘導劑,成本比BL21(DE3)以葡萄糖做碳源,以ITPG做誘導劑的表達模式低,適合工業級大規模表達外源蛋白。該菌株同時具有利福平抗性。HMS174 (DE3)是染色體上攜帶lacUV-T7 RNA聚合酶基因的專門用于蛋白表達的K-12菌株。該菌株適用于pET系列載體,及其他T7啟動子系列載體,與BLR(DE3)類似。經pUC19 質粒(2686bpAmpR)檢測轉化效率>1×107 cfu/μg DNA
注意事項
1. 感受態細胞解凍后應立即使用,不可在冰中放置過長時間。
2. 不能用移液器抽吸感受態細胞,用手指輕彈混勻即可。
3. 質粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉化。
使用方法
使用方法
1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態細胞,放入冰中5 min,加入目的質粒或連接產物,輕彈使混合均勻,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s,立即插入冰中靜置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液體培養基,37℃搖床220 rpm培養60 min;
4. 離心(質粒轉化無需離心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均勻涂布抗性平板,37℃培養箱放置過夜。



貨號品名規格品牌
78BDC10020-10×100uLHMS174 (DE3)10×100uLBIOHUB
78BDC10020-50×100uLHMS174 (DE3)50×100uLBIOHUB



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